Senyawa 1-(4-klorobenzoil)-1 3-dimetilurea telah dirancang disintesis diidentifikasi struktur dan diuji aktivitas sitotoksik secara in vitro. Simulasi docking dilakukan dengan memposisikan senyawa ke dalam sisi aktif reseptor Checkpoint kinase 1 (Chk1) untuk menentukan model pengikatan ligan reseptor. Sintesis 1-(4-klorobenzoil)-1 3-dimetilurea dilakukan lewat reaksi asilasi antara 1 3-dimetilurea dan 4-klorobenzoil klorida. Kemurnian produk hasil sintesis ditentukan dengan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT).Identifikasi struktur dilakukan dengan spektrofotometer UV FT-IR dan spektrometer NMR. Hasil uji antiproliferatif menunjukkan bahwa senyawa 1-(4-klorobenzoil)-1 3-dimetilurea memiliki aktivitas sitotoksik terhadap sel HeLa yang lebih baik dibandingkan dengan kontrol positif yaitu hidroksiurea. Senyawa 1-(4-klorobenzoil)-1 3-dimetilurea dengan potensi aktivitas sitotoksik ini dapat menjadi agen antikanker yang potensial.